乙
肝
表面
抗
原的
ELISA
法
定
量分析
方
法
學驗
證
姓名
Z
P
學號
0925400072
班級
09
級醫學檢驗本科二班
指導老師
沈
富
兵
二〇
一
三
年四
月
乙
肝
表面
抗
原定量測定的方法學驗證
作者:
ZP
(成都
醫學院檢驗醫學院
09
級醫學檢驗本科二班,
610500
)
【摘要
】
目的
用福州藍圖生物工程有限公司出品的乙肝表面抗原
ELISA
法定量分析試劑盒對乙肝表面
抗原定量測定的方法進行驗證,以判斷是否能用于教學以及臨床分析。
方
法
運用
ELLISA
法定量測定乙
肝表面抗原,應用試劑盒
HBsAg
標準從濃度為
8ng/ml
的
2
倍稀釋的
6
個濃度梯度,根據
OD
值繪制標準
曲線再計算相對回收率和板內和板間精密度,通過資料數據綜合分析。
結
果
HBsAg
線性較好,其準確
度、精密度、
LOD
值均在正常范內。
結論
ELISA
法定量檢測
HBsAg
能較準確、快速地反映體內乙肝病
毒復制情況,可以用于教學以及臨床分析。
【關鍵
詞】
乙肝表面抗原
方法學驗證
標準曲線
精密度
ELLISA
病毒性肝炎中乙型肝炎的危害較大,我國是病毒性乙型肝炎的高發流行區,
普通人群的乙型肝炎病毒
(hepatitis
B
virus
,
HBV)
感染率接近
60
%,約占世
界
HBV
攜帶者的
1/3
。乙型肝炎病毒的病原體不僅具有傳染性,還可能導致發
展
成
肝硬化,甚至肝癌,所以乙型肝炎病毒的早期、準確、定量檢測對乙型肝
炎
臨床
診斷、療效觀察及預防具有重要的意義。酶免分析法
HBV
—
EIA
是
HBV
抗原和
抗體
最常用的檢測技術,其方法簡便、價廉,適合一般實驗室推廣,其中酶
聯
免疫吸
附技術
(
enzyme
linked
immunosorbent
assay,
ELISA)
目前應用最為廣
泛,它
常用聚苯乙烯為固相載體,使其與待測標本中的相應抗體或抗原結合
,
然后加酶
標記的抗原或抗體,再加底物顯色,最后根據色澤深淺來推算待測
抗
原或抗體的
含量。此方法特異性高,有效測定范圍可達到
20500
ng/ml
,且酶免
疫法有標記
的試劑比較穩定并且無放射線危害等優點。
我們采用對已知抗體濃度的樣品進行
E
LISA
的
定量檢測,通過對其數據的分
析來驗證
ELISA
法最乙肝表面抗原定量
檢
測的準確性和可靠性,以衡量其實用性。
1
材料
與
方法
1.1
材料
1.1.1
試
劑盒
乙肝表面抗原
ELISA
法定量分析試劑盒,福州藍
圖
生物工程有限公司出品。
1.1.2
儀
器及
酶
標板
酶標儀:
Bio-Rad
680
;洗板機:
Bio-Rad
1575
;超純水系統:
Millipore
Elix
;電熱恒溫培養箱
(
DNP-9052):
上海精宏實驗設備有
限
公司。
1.1.3
溶
液配
制
⑴
0.01M
pH7.4
的
PBS
緩沖液:
稱取
8g NaCl
、
0.2g KCl
、
1.44g Na2HPO4
和
0.24g
KH2PO4,
溶于
800ml
蒸
餾水中,用
HCl
調
節
溶液的
pH
值至
7.4
,
最
后加蒸餾水定容至
1L
即
可。